Антонова Е.А. – ветеринарный врач-диетолог ИВЦ МВА
Бобровский М.А. – ветеринарный врач терапевтическое отделение ИВЦ МВА
Актуальность
Заживление ран - процесс восстановления, который следует после повреждения кожи и других мягких тканей [8]. Часто возникает необходимость проведения местного медикаментозного лечения раны с учетом фазы и особенностей течения раневого процесса, вызванного аэробными или анаэробными микроорганизмами. Появление новых российских препаратов для местного лечения ран в какой-то степени поможет решить проблему более активного местного воздействия на очаги инфекции различной локализации и происхождения, вызванные высокорезистентными госпитальными штаммами микроорганизмов, сопровождающимися выраженным болевым синдромом [2].
Изучаемая мазь – лекарственный препарат для ветеринарного применения. Действующие вещества: стрептоцид, хлорамфеникол (левомицетин), аллантоин, метилурацил и тримекаин.
Целью настоящих исследований было изучение влияния антибактериальной мази на организм крыс при многократном накожном нанесении в подостром опыте.
Материалы и методы
Настоящие исследования проводили в соответствии Методическими рекомендациями Фармакологического государственного комитета [1].
Опыт проводили на базе вивария ВНИИП ИМ. К.И. Скрябина. Для оценки подострой токсичности использовали беспородных крыс. В течение 14 суток после поступления в виварий животные находились в комнате карантинирования и адаптации для оценки показателей состояния здоровья. Крыс содержали в поликарбонатных клетках на отдельных стеллажах. В качестве подстила использовали древесные опилки. Содержание, кормление животных в виварии осуществляли согласно санитарным правилам и на стандартном рационе [2-7]. Корм и вода давались в волю.
Подготовку к опыту проводили в соответствии с указаниями ОФС «испытание на токсичность» ГФ XI. Перед опытом у животных забирали корм и воду. Через два часа животных взвешивали (весы ВСП-6/1-3К (Россия)) и распределяли по группам. Подбор животных в группы проводили произвольно методом «случайных чисел».
Изучение подострой токсичности при накожном нанесении проводили на 30 крысах-самцах исходной массой тела 180-200 г. Животных разделили на 3 равноценные группы по 10 крыс в каждой. Выбранные дозы представляли дозировки, кратные значению LD50, а точнее от максимально возможной для накожного нанесения дозы, установленной в остром опыте ( > 12500 мг/кг). Мазь наносили ежедневно в течение 30 суток на выстриженный участок кожи в области спины в дозах: 1/10 и 1/20 от LD50 (1250 и 625 мг/кг от LD50 12500 мг/кг). Животные контрольной группы препарат не получали. В течение всего периода наблюдали за общим состоянием и поведением животных, возможной гибелью, приемом корма и воды, видимыми физиологическими функциями, состояние шерстного покрова, кожи и т.п. Ежедневно у крыс регистрировали массу тела (весы ВР-05 МС-3/0,5-БР, Россия). На протяжении всего эксперимента обращали особое внимание на состояние кожи с целью выявления раздражающего действия при многократном нанесении мази. В конце опыта через 1 сутки после последнего нанесения мази всех животных каждой группы подвергали эвтаназии путем декапитации и отбирали пробы крови для определения гематологических и биохимических показателей. Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе PCE 90-vet (Китай); лейкоцитарную формулу – общепринятым методом. Биохимические показатели крови определяли на анализаторе Biosystems A-15 (Испания). Функциональное состояние ЦНС оценивали по визуальным наблюдениям за двигательной активностью и реакциями на внешние раздражители. Определяли массу основных органов (весы «CAS MWP-300», Южная Корея) и рассчитывали массовые коэффициенты. Проводили макроскопическое исследование органов (печени, легких, почек, сердца, селезенки и кожи), пробы которых отбирали у всех крыс каждой группы.
Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики с помощью простого сравнения средних по двухстороннему t-критерию Стьюдента. Различия определяли при 0,05 уровне значимости. Статистический анализ выполняли с помощью программы «Student-200».
Результаты исследований
Изучение влияния на общее состояние и поведение, динамику прироста массы тела крыс показало, что ежедневные аппликации мази во всех тестируемых дозах не привели к изменению общего состояния и поведения крыс. В начале и в конце опыта животные адекватно реагировали на внешние раздражители, охотно принимали корм и воду; у них был чистый и опрятный вид. На основе полученных данных, можно сделать вывод, что нанесение мази в дозах 1250 и 625 мг/кг не отразилось статистически значимым образом на текущих и конечных значениях привесов. Кроме того, процент к исходной массе тела был сравним с контрольными значениями.
Относительная масса органов является простым, но очень наглядным показателем токсического действия препаратов при их длительном применении.
По итогам эксперимента было установлено, что многократное нанесение мази не привело к изменению относительной массы ни одного из органов от крыс, получавших препарат в испытанных дозах. При макроскопическом исследовании органов крыс (печени, легких, почек, сердца, селезенки и кожи) после нанесения мази в двух дозах в течение 30 суток не было отмечено каких-либо изменений в структуре органов, по сравнению с контрольной группой. Анализ гематологических показателей показал, что многократное нанесение мази не привело к изменениям лейкоцитарной формулы, биохимические показатели сыворотки крови опытных животных также не претерпели достоверных изменений в сравнении с контрольными аналогами.
Выводы
В подостром опыте установлено, что дозы 1250 и 625 мг/кг не оказывают влияния на организм крыс и не действуют резорбтивно при нанесении на кожу.
Библиографический список
- Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ// под общей редакцией чл.-корр. РАМН, проф. Р.У. Хабриева, - Москва, 2005. - 832 с.
- Блатун, Л.?А. Мазь Офломелид. Клинико-лабораторная эффективность и переносимость у больных с инфекционными процессами кожи и мягких тканей / Л.А. Блатун, Митиш В.А. и др. // Журнал им. проф. Б.М. КостючёнКа – 2015 – Т.2 – С. 26-41.
- Приказ МЗ СССР № 1045-73 от 6.04.73 г. «Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально биологических клиник (вивариев)».
- Приказ МЗ РФ №708н от 23 августа 2010 г. «Правила лабораторной практики в Российской Федерации».
- Приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г. «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных»
- Приказ МЗ СССР № 163 от 10 марта 1966 г.; 1 января 1979 г. введены в действие «Временные суточные нормы гранулированных комбикормов для лабораторных животных», утвержденные МЗ СССР 4 декабря 1978г.
- Методические указания по стандартизации экологической среды лабораторных животных по фактору питания//Академия медицинских наук. – 1980.
- Vipin K. G., Sarvesh K. P. «Wound-healing activity of ethanolic and aqueous extracts of Ficus benghalensis» - J Adv Pharm Technol Res. 2011 Apr-Jun; 2(2): 110–114.