Стимуляция специфических и неспецифических защитных механизмов ор-ганизма кошек форветом при микроспории

Н.А.Масимов, В.Н.Байматов, Э.Н.Масимов, М.Д.Тимченко, Е.В.Хромова, ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

В статье приведены данные о действии форвета на гематологические и иммунологические показатели крови кошек, больных микроспорией и эффективность данного препарата в комплексной терапии животных.

Введение

По данным многих исследователей в настоящее время более 25% случаев обращения владельцев кошек к ветеринарным специалистам связано с заболеваниями кожного покрова ( 2,3,4,6). Кожа на сегодняшний день рассматривается не только как механический, но и иммунный барьер. В эпидермисе отсутствуют B–лимфоциты и низка активность киллеров, но  присутствует несколько разновидностей T–лимфоцитов (1,5).  Эпителиальные клетки  представлены кератиноцитами, имеются  стволовые эпидермальные клетки,  клетки Лангерганса. Кератиноциты  продуцируют  цитокины,  ряд ростовых факторов, которые  обеспечивают   процессы  клеточного размножения,  созревания и регенерации эпидермиса. При повреждении  эпидермиса  клетки  выделяют  цитокины действующие на   кератиноциты ( 5). В дерме обнаруживают  макрофаги, тучные клетки, которые выделяя медиаторы усиливают реакции воспаления. Такое инфекционное заболевание кожи как микроспория  представляет интерес для выявления защитных механизмов организма.  Важная роль отводится  клеточно - опосредственному иммунитету,  что имеет значение в лечении кошек при микроспории. У кошек, в зависимости от места и среды обитания, данная болезнь встречается в 3-4 раза чаще, чем у собак (5, 6).

Форвет содержит в качестве активной субстрации  высокомолекулярный  полисахаридный  комплекс, получаемый  путем обработки ростков клубней картофеля. Попадая в организм, полисахариды активируют клеточный иммунитет, оказывают общеукрепляющее действие, способствуют индукции интерферона ( 7,8).

Целью настоящей работы являлось изучение лечебных свойств форвета при микроспории кошек и его влияние на специфические и неспецифические показатели крови. Для реализации цели были поставлены следующие задачи: 1.Определить параметры некоторых специфических и неспецифических защитных механизмов организма кошек, больных микроспорией. 2.Выявить влияние форвета на защитные механизмы организма кошек, больных микроспорией и определить его терапевтическую эффективность.

Материалы и методы

В ООО «Зооветцентр Лебеди», г. Москва было выявлено 24 кошки, в возрасте от 4 месяцев до 2 лет (пород: британская, шотландская, персидская и беспородные кошки) пораженных микроспорией. Клиническими признаками  были  поражения кожи в виде округлых пятен алопеции и чешуек, утолщения и уплотнения кожи. Зуд у всех кошек отсутствовал. Диагноз на  микроспорию подтверждали  лабораторными методами. Животные были разделены на 3 группы по 8 в каждой. В первой группе больных животных лечили с использованием геля клотримазол, шампуня низорал и таблеток гризеофульвин в соответствие с наставлением по их применению; во второй – использовали  клотримазол и низорал; в третьей -  для лечения больных кошек было использовано клотримазол, низорал, гризеофульвин и препарат форвет в дозе 1,0 мл на 10 кг массы тела. Во всех группах лечебные процедуры повторялись через семь дней в течение трёх недель.

У всех кошек до и после  опыта брали  кровь для гематологических и иммунологических исследований.  Количество эритроцитов и гемоглобина определяли фотоэритрогемометром модели 065; лейкоциты – подсчетом в камере Горяева; СОЭ,гематокрит, цветовой показатель и ретракцию – по общепринятым методикам (Лютинский С.И., Степин В.С., 1987).

Лейкограмму, фагоцитарное число  определяли на мазках крови, окрашенных по Романовскому. Иммунобиологические – иммуноглобулины определяли фотометрированием. При определении бактерицидной активности инкубацию суточной культуры Е. соli с сывороткой крови проводили в течение 2 часов 15 минут, 24, 48 и 100 часов по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966). С этой целью в пробирки с 4,5 мл стерильного бульона или бульона Хоттингера добавляли по 1 мл испытуемой сыворотки, затем стерильной пипеткой вносили по 0,1 мл суточной бульонной культуры Е. Соli.  Контролем служили пробирки с бульоном и культурой, но без сыворотки.

Содержимое пробирок тщательно перемешивали и стерильной пипеткой от каждой пробы отбирали по 2 мл для измерения оптической плотности. Измерения проводили в кюветах толщиной 3,050 мм при зеленом светофильтре против дистиллированной воды. Пробирки с оставшимся содержимым (МПБ + сыворотка + культура микроба ) закрывали пробками и помещали в термостат при 37° на 2 часа 15 минут, 3, 24, 48 и 100 часов. Затем вновь определяли оптическую плотность, т.е. находили Д 2 . Бактерицидную активность исследуемой сыворотки выражали в процентах, вычисляя по формуле. Лизоцимную активность сыворотки крови устанавливали по В.Г. Дорофейчуку (1983).

В качестве индикатора активности лизоцима применяли суточную культуру Micrococcus Lysodecticus, выращенную на МПА по общепринятой методике. Из суточной тест-культуры Micrococcus Lysodecticus на скошенном агаре готовили взвесь в фосфатном буфере (рН 7,2-7,4). Для получения равномерной взвеси ее фильтровали через слой ваты. Взвесь стандартизировали на ФЭК-Н с зеленым светофильтром в кюветах с толщиной 3,050 мм. Для определения активности лизоцима в обычные микробиологические пробирки наливали 1,47 мл приготовленной на ФЭК-Н микробной взвеси Micrococcus Lysodecticus и добавляли 0,03 мл цельной сыворотки.

Активность лизоцима в сыворотке устанавливали при разведении ее микробной взвесью в 50 раз. Пробирки встряхивали и помещали в термостат при температуре 37°С на один час. После этого их снова встряхивали и нефелометрировали при тех же условиях, которые соблюдались при стандартизации исходной взвеси. Показания регистрировали по шкале светопропускания  правого барабана ФЭК-Н. Активность лизоцима определяли по светопропусканию исходной взвеси (20%), которую вычитали из аналогичного показания испытуемой взвеси (в%). Рассчитывали количество (%) лизированных микробных тел по формуле. Полученные результаты сравнивали с нормативами. Экспериментальные данные обрабатывали методом вариационной статистики (Плохинский Н.А., 1969) с использованием ПК Pentium. Определяли следующие величины: средняя арифметическая (М), ошибка средней арифметической (± m), критерий достоверности разницы (td), уровень значимости возможной ошибки (Р) по трем порогам вероятности: * – Р=0,95; ** – Р=0,99; *** – Р=0,999. Результаты исследований, уровень вероятности которых не превышал 0,05, считали статистически достоверными (Ойвин И.А., 1960; Рокицкий П.Ф., 1961; Плохинский Н.А., 1969).

Результаты исследований

У всех кошек  показатели крови, при микроспории имели отклонения от физиологической нормы.  Был выявлен лейкоцитоз, сдвиг лейкограммы вправо. При изучении неспецифических факторов защиты крови у кошек  установлено, что наиболее благоприятное влияние оказывает лечение в третьей группе, где гуморальные факторы естественной защиты, такие как  бактерицидная и лизоцимная активность повышались.  Одним из компонентов, обусловливающих бактерицидное действие сыворотки крови, является комплемент. Свое действие во всех иммунных процессах организма он проявляет как катализатор, повышая скорость течения иммунологических реакций и активируя  полиморфноядерные лейкоциты, у которых после этого повышается способность проникать к месту воспаления и оказывать защитные свойства. Высокая бактерицидная активность крови, способная задерживать рост микроорганизмов многих видов обусловливается содержащимися в ней лизоцимом, комплементом, пропердином, интерфероном, а также присутствием так называемых бактериолизинов, способных растворять бактерийный клетки. Кроме антибактериального действия лизоцим стимулирует естественную резистентность  организма.

При  анализе данных отмечены различия по группам в клинических, гематологических и иммунологических показателях. Препарат форвет в составе  комплексной терапии  сокращает  сроки  выздоровления кошек больных  микроспорией.  Это связано вероятно с увеличением иммуноглобулинов. Через 7 дней после начала лечения был проведен контрольный осмотр животных проходивших лечение. У животных  первой группы имелись пораженные участки  без чешуек, кожа  естественного  цвета, а  алопеции диаметром до 0,5 см покрылись шерстью. В крови незначительно повысилось содержание Ig A,  Ig M, но уменьшился  Ig G. Во второй группе, лишь у 2-х животных присутствовали признаки клинических улучшений. В крови кошек достоверно повышался Ig A и незначительно Ig M и Ig G. У 3-х кошек появились новые очаги поражений. У животных третьей группы  наблюдали улучшение: на 60-70% поверхности участки алопеций имели шерстный покров, полностью отсутствовали чешуйчатые изменения. В крови достоверно выше был  Ig A, бактерицидная активуность, фагоцитарное число  и имели тенденцию к повышению  Ig M и Ig G. При лабораторном исследовании шерсти больных животных в первой группе микроспория подтвердилась в 2-х случаях, во второй группе в 6-ти, а в третьей результаты исследования оказались отрицательными.

Таблица 1
Результаты гематологических исследований у кошек, больных микроспорией

Таблица 2
Результаты иммунологических исследований кошек больных микроспорией

Третий осмотр больных животных прошел на 28 день лечения. В результате которого, в первой и третьей группах споры Microsporum саnis не были обнаружены, а в оставшейся второй группе микроспория подтвердилась у 4-х животных.  

Учитывая литературные и  собственные  данные  нами  предлагается схема влияния форвета на  спецефические  и  неспецефические защитные механизмы  организма. В конечном итоге  все  они  направленны на  востановление  структуры и  функции поврежденных органов и  тканей.

Выводы

1. Микроспория у кошек протекает с классическими симптомами, характерными клиническими признаками. В тоже время существенных изменений в поведение животных нами не выявлено.
2. Введение форвета при комбинированном лечение микроспории приводит к регрессии патологического состояния в течение 14….20 дней. Характерными особенностями фармакологического спектра препарата является повышение жизнеспособности клеток кожи в присутствие микроспор. В крови активируются лейкоциты и повышаются иммуноглобулины, что видимо имеет иммуномодулирующие действие и блокирует размножение микроспор. Это позволяет использовать его в терапии инфекционных болезней.
3. Форвет – оригинальный отечественный ветеринарный препарат растительного происхождения , не имеющий аналогов в России и за рубежом. Он получен путём обработки побегов растения Solanum Tuberosum (картофель) и представляет собой высокомолекулярный полисахаридный комплекс, состоящий из рамнозы, арабинозы, глюкозы, галактозы, ксилозы, маннозы, уроновых кислот. Форвет в дозе 1.0 мл на 10 кг массы животного в течение 7 дней обладает лечебным действием при микроспории кошек, иммуномодулирующим, цитопротективным действием, влияет на регенерацию кожи.

Литература

1. Кирк Р., Бонагура Д. Современный курс ветеринарной медицины Кирка - М.: Аквариум, 2005.
2.  Левятова Н.И. Дермтофитозы кошек и собак - материалы 16 Международного конгресса по болезням мелких домашних животных, 2008    
3. Масимов Н.А., Лебедько С.И. Инфекционные болезни собак и кошек, СПб.:Издательство «Лань»,- 2009,- 128 с.(Учебник для вузов. Специальная   литература)
4. Масимов Н.А., Масимов Э.Н. Влияние ронколейкина на гематологические и иммунологические показатели собак, больных демодекозом/Российский журнал. Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии №2(10) 2013 г. с.67-69
5. Медведев К.С. Болезни кожи собак и кошек - Киев:ВИМА, 1999. – с.ил.
6. Патерсон С. Кожные болезни кошек, М.: Аквариум, 2008. – 165с.
7. Рэмси Я., Теннант Б. Инфекционные болезни собак и кошек. Практическое руководство, М.: Аквариум-Принт, 2005. – 304с.
8. Старченков С.В. Болезни мелких животных.- С.-Петербург:Изд-во Лань, 1999.- 286-287с.
9. Стовбун С.В., Лепехин А.В., Ратникова Л.И., Литвин А.А., Сергиенко В.И., Опыт применения панавира в терапии клещевого энцефалита.- Инфекционные болезни, №1, т. 5, 2007.-С. 41-46.
10. Стовбун С.В., Михайлов А.И. Тезисы //XXIII симпозиум.- Современная химическая физика, Туапсе.-  2011.- С. 123